5. OBTENCIÓ D'UN ADN RECOMBINANT

A la unió de l'insert d'interès i el vector se l'anomena lligació. Consisteix enbarrejar en un tub el vector, l'insert (en el nostre cas la resta de producte de PCR que hem reservat i purificat), i l'enzim lligasa, que s'encarrega de la seva unió.

• Insert d’interès (ADN) quantificat

• Vector (quantificat)

• Microtubs de 1.5 ml

• Micropipetes 10µl -100µl i 100µl-1000µl

• Enzim lligasa

• Tampó lligasa

• Aigua mil·liQ

1. Barrejar els components començant per l’aigua i acabant per l’enzim, segons la següent taula:

2. Deixar la lligació durant tota la nit a 4°C. El producte final de la lligació és l'ADN recombinant.