8. CULTIU BACTERIÀ LÍQUID

Durada aproximada del protocol: 1 dia

DESCRIPCIÓ

El cultiu líquid de cèl·lules d’E.coli es realitza en tubs de cultiu a 37ºC en agitació a 250 rpm. Pot interessar fer-lo per diferents aplicacions posteriors. En el cas de les pràctiques que ens ocupen, el fem servir per fer créixer cèl·lules transformades i obtenir-ne després ADN plasmídic.

REACTIUS i MEDIS UTILITZATS EN LA PRÀCTICA

MEDI LB:

Bactotriptona 100 g/L, extracte de llevat 5 g/L i NaCl 10 g/L. Ajustar el pH a 7.5 amb NaOH. Per al medi sòlid s’afegeix 15 g/L d’agar. Esterilitzar per calor humit (mitjançant autoclau de vapor d’aigua a 120ºC i una atmosfera de pressió, durant 20 min).

AMPICIL·LINA (antibiòtic):

Concentració stock, 100 mg/mL; concentració treball, 100 μg/mL.

MATERIALS I EQUIPS NECESSARIS

  • Placa de petri amb colònies d’E.coli.

  • Medi LB suplementat amb l’antibiòtic adequat

  • Tubs de cultiu estèrils.

  • Pipetes estèrils.

  • Puntes estèrils.

  • Incubador amb agitador.

METODOLOGIA

  1. Sota campana de flux i amb un bunsen encès, pipetejar dins de cada tub 3 mL de medi LB+ antibiòtic.

  2. Inocular una colònia aïllada dins de cada tub, punxant-la amb una punta estèril i fent caure aquesta dins del tub.

  3. incubar a 37ºC en agitació a 250 rpm O/N.