Embedded Files
Durada aproximada del protocol: 1 dia
DESCRIPCIÓ
El cultiu líquid de cèl·lules d’E.coli es realitza en tubs de cultiu a 37ºC en agitació a 250 rpm. Pot interessar fer-lo per diferents aplicacions posteriors. En el cas de les pràctiques que ens ocupen, el fem servir per fer créixer cèl·lules transformades i obtenir-ne després ADN plasmídic.
REACTIUS i MEDIS UTILITZATS EN LA PRÀCTICA
MEDI LB:
Bactotriptona 100 g/L, extracte de llevat 5 g/L i NaCl 10 g/L. Ajustar el pH a 7.5 amb NaOH. Per al medi sòlid s’afegeix 15 g/L d’agar. Esterilitzar per calor humit (mitjançant autoclau de vapor d’aigua a 120ºC i una atmosfera de pressió, durant 20 min).
AMPICIL·LINA (antibiòtic):
Concentració stock, 100 mg/mL; concentració treball, 100 μg/mL.
MATERIALS I EQUIPS NECESSARIS
Placa de petri amb colònies d’E.coli.
Medi LB suplementat amb l’antibiòtic adequat
Tubs de cultiu estèrils.
Pipetes estèrils.
Puntes estèrils.
Incubador amb agitador.
METODOLOGIA
Sota campana de flux i amb un bunsen encès, pipetejar dins de cada tub 3 mL de medi LB+ antibiòtic.
Inocular una colònia aïllada dins de cada tub, punxant-la amb una punta estèril i fent caure aquesta dins del tub.
incubar a 37ºC en agitació a 250 rpm O/N.
Page updated
Report abuse